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    1. 人體用布魯氏菌病試管凝集抗原

           人體用布魯氏菌病試管凝集抗原用于體外定性檢測人血清樣本中布魯氏菌抗體,檢測結果僅用于科研學術參考,不能作為臨床診斷依據。

      【產品名稱】通用名稱:布魯氏菌病試管凝集抗原

      【包裝規格】12ml/瓶

      【預期用途】本品用于體外定性檢測人血清樣本中布魯氏菌抗體,檢測結果僅用于科研學術參考,不能作為臨床診斷依據。

      布魯氏菌病是由布魯氏菌屬細菌引起的人畜共患的傳染病。布魯氏菌具有很強的侵襲力和擴散力,當人與牲畜及其污染物接觸過程中,可以經過皮膚、消化道、呼吸道黏膜等侵入人體。布魯氏菌抗體的產生始于感染后的2-3周。血液中產生的抗體可反映出感染的發生及發展過程,因此檢查血液中布魯氏菌抗體對了解布魯氏菌病的感染、發病、治愈等具有一定的意義。

      布魯氏菌病試管凝集試驗(SAT)是比較穩定、特異且較敏感的一種血清學方法,可以檢測人與動物血清中的抗布魯氏菌 IgG、IgM和 IgA三類免疫球蛋白抗體,但主要檢測的是 IgM和 IgG型抗體,且 SAT檢測IgM的敏感性顯著高于IgG,因此可作為人與動物感染布魯氏菌病的早期診斷;同時也可用于布魯氏菌疫苗免疫后機體抗體水平的檢測;若進行多次SAT,血清中凝集價不斷上升則診斷意義更大。在實際應用中SAT常用作布病普查的復檢與確證。

      【檢驗原理】在37℃條件下,適宜濃度的菌體抗原可充分反應結合血清樣本中布魯氏菌抗體,反應結束后,根據其凝集程度可以判定血清樣本中布魯氏菌抗體滴度的高低。

      【主要組成成分及性狀】本品為乳白色液體,長時間靜置后瓶底可見白色沉淀,震搖后為均勻懸浮液。試劑的主要成分是經加熱滅活的布魯氏菌牛型 104M株菌體,菌體懸于含 5g/L苯酚的生理鹽水中。

      【儲存條件及有效期】 于 2~ 8℃下保存,有效期24個月。試劑反復多次開瓶使用后,6個月內試劑性能不發生變化。  生產日期、有效期至:見標簽。 

      【 運 輸 條 件 】 2~ 30℃運輸(30℃不超過6天)。

      【實驗器具】1.試驗應使用潔凈且透明度好的試管。2.試驗使用的吸管或移液器吸頭使用前應徹底清洗。

      【樣本要求】

      1.樣本的處理,應采集空腹待檢者的血液不少于1mL,靜置或離心后采集血清。

      2.樣本的儲存,血清樣品若在一周內進行檢測可儲存在 2~ 8℃條件下;若超過一周之后檢測應將樣本儲存于 -20℃條件下,同時應避免反復凍融。

      3.已知的干擾物:

      ① 患者治療期間,血清中藥物成分會造成部分血清樣本的凝集現象不明顯甚至出現假陰性,可選擇在療程間隔期進行復檢樣本的血清學檢驗。

      ② 出現明顯溶血、微生物污染的樣本不能用于檢測。

      ③ 在以下干擾物質濃度條件下,對布魯氏菌抗體檢測的結果影響較?。?總膽固醇≤ 10mmol/L ,類風濕因子≤ 300IU/mL ,總膽紅素≤ 43umol/L。

      【檢驗方法】

      1. 反應于室溫(18~ 25℃)條件下進行,試驗前將試劑、待檢樣本以及試管、吸管等用具應置于室溫下平衡 30分鐘以上。

      2. 試劑使用前應充分搖勻。

      3. 稀釋液:0.5%苯酚生理鹽水。

      4. 稀釋抗原液:布氏桿菌病試管凝集試驗抗原用稀釋液作1:10稀釋使用。

      5. 準備五支試驗管(以做5個滴度為例),第一試管加入2.3ml生理鹽水,其余試管加入0.5ml生理鹽水。

      6. 取0.2ml待檢血清加入第一試管2.3ml生理鹽水內,混勻后取0.5ml加入第二試管做1:1稀釋,第二試管混勻后取0.5ml加入第三試管做1:1稀釋,以后各血清稀釋管以此類推,第一管內應棄去1.5ml剩余稀釋血清,最后一管棄去0.5ml剩余稀釋血清,只留下0.5ml為試驗用。

      7. 將稀釋抗原液0.5ml分別加入以上各試驗管,各管內待檢血清分別稀釋為1:25,1:50,1:100,1:200,1:400。

      8. 陰陽對照試驗管制備:將陰陽對照血清按要求體積稀釋后,操作步驟參照5.6.7。

      9. 比濁管制備:取稀釋抗原液1.25ml,再加入等量的稀釋液作倍比(1:1)稀釋,制成稀釋抗原液A(1:20), 再按下表配制比濁管:

      比濁管管號   稀釋抗原液A (ml)      稀釋液(ml)       清亮度       標記

      1        0.00          1.00          100%         ++++

      2      0.25           0.75          75%            +++

      3      0.50           0.50          50%             ++

      4      0.75            0.25         25%              +

      5       1.00         0.00           0%             -

      ++++:完全凝集,上層液100%清亮;+++:幾乎完全凝集,上層液75%清亮;++:顯著凝集,液體50%清亮;+:有微量凝集,液體25%清亮;-:無凝集,液體不清亮。

      10. 孵育:將試驗管,對照管及比濁管充分振蕩后置37℃±l℃溫箱中孵育20-22h,取出室溫靜置2小時,不需搖晃,以比濁管為標準判定結果?!?/span>

      【檢測結果的解釋】

      根據各反應管內上層液體的清亮度判定結果。特別是50%清亮度(++)對判定結果關系較大,一定要與比濁管對比判定。待檢血清效價在1:100(++)及以上者或病程一年以上滴度1∶50(++)及以上者為陽性。以出現“++”及以上凝集現象的最高血清稀釋度判斷為該血清的抗體滴度.對于檢出的陽性病例在10天~ 14天后進行復檢有利于更準確進行布魯氏菌病的診斷。

      【診斷標準】布魯氏菌病診斷標準(WS268-2007)。

      【產品性能指標】 抗原凝集效價不低于1:1000(++)。

      【檢驗方法的局限性】                                                                              

      1、本試劑檢測用樣本為人血清,在樣品保存、使用過程中,應注意因樣本可能存在潛在病原微生物(乙型肝炎、丙型肝炎、梅毒及 HIV 病毒)等引起感染風險。

      2、該試驗作為單一的診斷方法是不完善的,凝集反應陽性時有診斷意義,由于有時會出現前帶及封閉現象即使凝集反應陰性時也不能否定布魯氏菌病,應與虎紅平板凝集實驗(BPAT)、平板凝集實驗(PAT)及抗人免疫球蛋白試驗(Coomb’s)等結合使用。

      3、該試驗操作較麻煩、費時、費力,不適合于用作大規模的篩選檢測。另外該方法不能區分人工免疫和自然感染,并不是所有感染情形都出現具有診斷意義的抗體水平,單獨使用SAT時易造成誤診和漏診。

      4、當被檢測血清樣本中布魯氏菌抗體含量超過1000IU/mL時,試驗會出現不同程度的前帶現象。

      5、根據文獻報道及試驗結果,布魯氏菌與腸炎耶爾辛氏O:9、甲型副傷寒沙門氏菌、大腸桿菌O:157、霍亂弧菌、土拉熱弗朗西斯菌存在共同抗原,注意在檢測過程中可能出現的交叉反應,應對此予以鑒別。

      【注意事項】                                                                                      

      1.嚴格按說明書進行操作,準確加樣并保證試驗的溫度條件,低溫條件下反應的靈敏度會降低;按要求的時間及時觀察,以免影響結果的判定。建議每次檢測時進行陽性及陰性對照實驗,只有在對照實驗成立的前提下,檢測結果才有意義。

      2.試劑使用完后立即擰緊瓶蓋,于 2~ 8℃下避光保存,嚴禁凍存。

      3.試劑使用前應充分搖勻;應在有效期內使用,若瓶內出現顆?;驌u振不散的凝塊時切勿使用。

      4.試劑含有苯酚及其它腐蝕性化學成份,接觸或吞食對人體可造成危險!一旦接觸到皮膚應立即用大量的水進行沖洗,必要時需到醫院就診。

      5.試驗過程中按照實驗室規定采取必要的安全防護措施。

      6.樣品、洗滌液、廢棄物和試驗用具都視同有傳染性的物品,請遵循國家和地方的相應法規和要求,采用安全和可接受的方法對所有材料進行處理。

      7.本品作為科研試劑,檢測結果僅用于科研學術交流,不能作為臨床診斷依據。

       

       

       

       

       

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